Deskripsi

Invensi ini berkaitan dengan metode pembuatan sekretom dari kultur sel punca pulpa gigi untuk terapi rekayasa jaringan. meliputi tahapan revitalisasi sel punca DPSC dengan cara menumbuhkan sel punca pulpa gigi hasil isolasi sebelumnya dalam flask T-75 menggunakan medium (DMEM)lengkap. Proses subkultur dengan cara membuang medium DMEM dalam flask lalu diganti dengan 5 mL Tripsin/EDTA. Setelah itu diinkubasi di inkubator CO2 selama 15-30 menit sebelum sel dipanen. Resuspensi sel paska panen dengan menambahkan 10 mL medium DMEM lengkap. Pencucian sel hasil tahap c dengan 10 mL PBS steril, lalu disentrifugasi pada suhu ruang. Kemudian supernatan dibuang, sel lalu ditambahkan 10 mL medium DMEM lengkap dan dimasukkan ke dalam flask T-75. Subkultur sel menggunakan 15 mL medium DMEM lengkap dalam flask T-75 pada di inkubator CO2. Setiap 3 hari hingga sel konfluen dilakukan penggantian medium. Pemisahan sekretom setelah subkultur ke 3, isolat sel punca disubkultur ke flask T-75 lalu diinkubasi di inkubator CO2 5% pada suhu 37oC. Setelah 4-5 jam sebanyak 20 mL medium DMEM dipindahkan ke tabung 50 mL. Pemekatan sekretom menggunakan ultrafiltration unit Millipore. Pengukuran konsentrasi protein total dalam sekretom menggunakan metode Bradford dan dibaca pada mesin Spektrofotometer UV/Vis pada panjang gelombang 595 nanometer. Kemudian simpan sekretom dalam vial steril pada lemari pendingin minus 20 derajat Celsius.

Inventor

• 1. Prof. drg. Endang Winiati, M.Biomed., Ph.D., PBO
• 2. Prof. drg. Boy Muchlis Bachtiar, MS., Ph.D., PBO
• 3. David Tjong Sugianto

Informasi Patent